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本试验将新鲜的草石蚕洗净榨汁加入2％NaCl和葡萄糖制成草石蚕菜汁培养基并接入乳酸菌来模拟乳酸菌发酵草石蚕的实际情况。降解亚硝酸盐能力最强，培养48h后降解率可达到82.83％：产叶酸能力最强，培养48h后其叶酸含量可达12.5g/L。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：叶酸，乳酸菌，亚硝酸盐，植物乳杆菌。植物乳杆菌ZJ316组共检出41种物质，其中醇类15种、酯类3种、酸类7种、醛类3种、酮类9种、烷类1种、其它类物质2种：沙克乳杆菌ZFM225组共检出19种物质，其中醇类5种、酯类2种、酸类2种、醛类3种、烷类2种、酮类5种。副干酪乳杆菌ZFM54叶酸产量为0.85g/100mL。2.5 产叶酸能力2.5.1 叶酸标准曲线按试剂盒说明书要求配置叶酸标品(如表3所示)，按照对应质量浓度梯度作出标准曲线：y=0.7536x-0.0003(R2=0.9813)，曲线线性较为良好.可以用来分析样品叶酸的质量浓度。之后用酶标仪在指定区域读出样品的0D540nm值，并经分析软件RIDA、SOFTWin分析得到3株乳酸菌株产叶酸情况。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品学报》，版权归原作者所有。进一步研究发现，在3株菌中植物乳杆菌ZJ316产酸能力最强，培养24h后使环境pH降到4.18，酸度达到0.45％。因此，建立灵敏度高、准确可靠的乳制品中4种常用香料的检测方法对乳制品质量安全监管具有重要意义。

目前，此四种化合物同时检测的方法主要有分光光度法，高效液相色谱法，二维液相色谱法，气相色谱-质谱法，液相色谱-串联质谱法等。过柱净化富集过程：吸取上清液5mL转移至另一离心管，加入5mL0.2mol/L氢氧化钠溶液反萃，去掉上清液，40℃下用GenevacEZ2溶剂蒸发工作站浓缩20min，除去微量的叔丁基甲醚。气相色谱-质谱法分析时间较长。乳制品样品（包括婴幼儿配方乳粉、炼奶、黄油、奶酪、鲜牛奶、纯牛奶、稀奶油、酸奶等共15份）均购自海口市本地大型超市。

液相色谱-串联质谱法具有灵敏度高、特异性强、分析速度快等优点，广泛应用于食品中香料物质的检测。然而，在LCMS/MS分析中，基质效应严重影响定量分析的准确度和精密度，目前文献报道LC-MS/MS测定乳粉中四种常用香料化合物均存在较强的基质效应，需采用基质匹配曲线或者内标法进行定量分析，大大增加了检测成本，此外，前处理过程需要对净化液进行浓缩，而挥发性较强的香料化合物在浓缩过程中易损失。

其中，分光光度法和液相色谱法检测限较高，多种乳制品中要求不得添加食用香精，较高的检测限可能会导致低含量的添加样品无法检出。色谱柱：HSST3色谱柱（100mm2.1mm，2.5m）、BEHC18色谱柱（100mm2.1mm，1.7m）、HLB固相萃取柱（100mg，3mL）、TQD超高效液相色谱-质谱联用仪，美国Waters公司。HLB过柱方法：除醚后用盐酸调节pH至3.0，先后加入3mL甲醇，3mL超纯水活化固相萃取柱，然后全部上样，样液体积约为4.5mL，重力过柱后，用5mL纯水淋洗，弃去淋洗液，接着用5mL注射器抽干，最后用1mL甲醇洗脱。PXA过柱方法：先后加入3mL甲醇，3mL超纯水活化固相萃取柱，然后全部上样，样液体积约为4.5mL，重力过柱后，分别用3mL5%氨水甲醇和3mL甲醇淋洗，抽干，最后用1mL5%甲酸甲醇洗脱。

扫描模式：多反应监测模式（MRM），带星号离子为定量离子。国家卫计委发布实施的GB2760-2014《食品添加剂使用标准》中明确指出不得添加食用香料、香精有27种食品，其中包括巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳、无水黄油、稀奶油和婴幼儿配方乳粉等多种乳制品。流动相，A相为甲醇，B相为0.05%甲酸水，梯度洗脱程序为0～1.0min，10%～25%A，1.0～5.0min，25%A，5.0～5.1min，25%～60%A，5.1～6.0min，60%A，6.0～6.1min，60%～90%A，6.1～7.0min，90%A，7.0～7.1min，90%～10%A，7.1～8.0min，10%AMS条件：电喷雾正离子源（ESI+），毛细管电压：3.0kV，离子源温度：150℃，脱溶剂管温度：350℃，雾化气：150L/hr氮气，干燥气：650L/hr氮气，碰撞气：氩气。试验结果采用平均值表示，每个试验平行三次，采用Excel2010进行数据处理。

乳制品中添加食用香精香料可以提高食品的风味，但长期食用添加香精的奶粉可能使新生儿对其产生依赖性，过量摄入会引发潜在的健康问题，因此香精香料的超范围及过量使用问题日益引起人们的关注。巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳、稀奶油等液体乳制品，直接称取5g试样于50mL聚丙烯离心管中，再加入20mL叔丁基甲醚提取，后处理步骤同奶粉等样品。

KQ3200DE超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。320R低温离心机，德国Hettich公司。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。麦芽酚（纯度99%）、乙基麦芽酚（纯度99%）、香兰素（纯度98%）、乙基香兰素（纯度98%）美国Sigma公司。相关链接：叔丁基甲醚，麦芽酚，香兰素，乙基麦芽酚声明：本文所用图片、文字来源《食品工业科技》，版权归原作者所有。受酚类化合物可采用酸碱分配法净化的启发，本文采用水-醚体系对乳制品样品进行提取，经碱液反萃除去杂质后采用高灵敏度高选择性的液相色谱串联质谱分析四种化合物。乳制品是非常重要的营养补充，是日常饮食的重要组成部分，对增强国民身体素质具有重要的意义，尤其是婴幼儿乳粉作为婴幼儿阶段的主要营养来源，更是人们关注的重点。通过研究不同比例碱醚比的碱液反萃醚相中的香料化合物，实现样品净化和富集同步进行，整个过程无需氮吹浓缩，避免挥发性较强的香料化合物在氮吹浓缩过程中损失，以期建立一种灵敏度高、简便快捷、准确可靠的乳制品中四种常用香料的检测方法，为相关部门建立相关测定标准提供参考，保障乳制品的质量安全。

1.2 实验方法1.2.1 样品前处理奶粉、奶酪、炼奶、黄油等类固体乳制品：称取2g试样（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入5mL50℃的水（黄油样品置于100℃烘箱中加热使之溶解，炼奶用4mL水溶解），3000r/min涡旋混匀2min，40℃下超声提取15min，超声频率为37kHz，再加入20mL叔丁基甲醚，3000r/min涡旋混匀3min，再加入10g无水硫酸钠除水，3000r/min涡旋混匀2min，9000r/min离心3min，吸取上清液10mL转移至另一离心管中，再加入2mL0.2mol/L氢氧化钠溶液反萃，3000r/min涡旋混匀1min后，3000r/min离心3min，用移液器准确移取下层清液0.9mL至刻度试管中，加甲酸定容至1.0mL过0.22m微孔滤膜，供液相色谱-质谱测定。1.2.2 色谱-质谱条件色谱柱：HSST3色谱柱（100mm2.1mm，2.5m，Waters）。

1 材料与方法1.1 材料与仪器甲醇、乙腈、叔丁基甲醚色谱纯，美国TEDIA公司。GenevacEZ-2型溶剂蒸发工作站，英国SPScientific公司。

MS3涡旋仪，德国IKA公司。香兰素和乙基香兰素具有强烈的奶香味，麦芽酚和乙基麦芽酚是广谱香味增效剂，此四种香料广泛用于各种具有奶香味的食品中

由图4可知，小鼠巨噬细胞RAW264.7经过1g/mL的LPS催化刺激后，较空白组而言，4种炎症因子iNOS、COX-2、TNF-及IL-1mRNA相对表达水平都有显著上升（P＜0.05），分别升至0.918，0.965，1.084和0.927。其浓度与抑制率呈线性相关关系，回归方程为Y=58.97X+23.064，R=0.9905，求其IC50是0.46mg/mL。Li等发现莲子糖蛋白可以有效抑制炎症因子NO的产生，抑制经LPS刺激后的小鼠巨噬细胞RAW264.7中炎症介质的产生。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品学报》，版权归原作者所有。

一定范围内，抑制率与SEG-2浓度呈线性相关，其回归方程为Y=39.074X+14.36，R=0.9962，求得IC50为0.912mg/mL。SEG-2与阿卡波糖的抑制能力均随浓度的增加而不断提高，表明糖蛋白SEG-2具有较好的淀粉酶抑制能力，但弱于阿卡波糖。

而SEG-2抑制-淀粉酶的能力最强，抑制率可达64.5%。大多数蛋白质是糖蛋白。

2.2.2 SEG-2的-葡萄糖苷酶抑制率及半数抑制浓度的测定结果分析SEG-2对-葡萄糖苷酶的抑制作用的结果如图6所示。水洗糖蛋白WEG抑制-淀粉酶的能力最弱，抑制率为52.5%。

2.2.4 SEG-2的-淀粉酶抑制率及半数抑制浓度的测定结果分析SEG-2对-淀粉酶的抑制作用的结果如图8所示。SEG-2对-葡萄糖苷酶的抑制效果最强，抑制率高达65.71%。本文通过试验手段，分离纯化所提取的GBRG，获取不同的3种糖蛋白组分WEG、SEG-1和SEG-2。因此，糖蛋白SEG-2在整体上具有良好的酶抑制活性，并且在0.6mg/mL的质量浓度下抑制效果最佳。

由图6可知，质量浓度在0～0.6mg/mL的范围内，SEG-2抑制-葡萄糖苷酶的能力随SEG-2浓度的增加而提高。由图5可知，3种GBRG组分均具有一定的-葡萄糖苷酶的抑制效果。

水洗糖蛋白WEG对-葡萄糖苷酶的抑制效果最弱，抑制率为36.67%。尽管3种糖蛋白对-淀粉酶有所抑制，但总体上稍弱于阿卡波糖。

由图7可知，3种GBRG组分均对-淀粉酶有较强的抑制效果。盐洗糖蛋白SEG-1抑制-淀粉酶的能力弱于SEG-2，抑制率为58.5%。